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ABGENT为客户提供开放式平台,帮助客户解决售前、售中、售后遇到的各种常见问题。我们也欢迎您发邮件或来电咨询,ABGENT将竭诚为您服务。

ABGENT产品

请参照产品订购指南进行订购或定制ABGENT产品,您也可通过以下方式与我们取得联系。电子邮件:sales.abgent@wuxiapptec.com,电话:0512 66172513。

我们的产品目录号提供了相关信息:AE、AF、AP表示多克隆抗体,AJ、AM、AO、AT表示单克隆抗体,实际判断请以抗体说明书为准。

我们的单克隆抗体大多是通过BALB/c小鼠制备的,多克隆抗体大多是通过新西兰兔制备的。客户抗体定制服务也主要是使用这两种动物。

我们常规使用的抗原包括天然的蛋白、重组蛋白和合成多肽。如果合成多肽分子量小于8 kDa,需通过半胱氨酸的巯基将多肽偶联到KLH或BSA上。

如果您想了解我们抗原的详细信息,包括多肽序列,您可以通过电子邮件tech.abgent@wuxiapptec.com把您的需求告诉我们,我们会及时给您回复。

不会,我们的磷酸化抗体都是依次经过对应的非磷酸化多肽和磷酸化多肽两步亲和纯化得到的,是磷酸化抗原位点特异性的,不会与非磷酸化抗原产生交叉反应。

抗体效价通常用ELISA来检测,我们使用ELISA板条包被抗原并洗去未结合的抗原。在ELISA检测中我们使用的是未经偶联的多肽。逐步稀释的抗体被加入ELISA板孔内,并洗去未结合的抗体。最后加入标记的二抗,通过显色的数值反应抗体的效价。

① 增加转印时间。

② 在转印缓冲液中添加0.01%或0.02%的SDS以提高蛋白从胶中转出的效率。

③ 减少转印缓冲液中甲醇的量。

④ 使用低浓度的胶更利于转印。

使用PVDF膜时需要经过多步严格的封闭过程。可以通过增加2-5倍封闭液的浓度,延长封闭时间(如封闭液孵育过夜)和在37℃下进行封闭来提高效果,通过封闭液与空位点结合来消除背景,并与膜蛋白结合降低其与一抗的非特异性结合。 一些常用封闭液有脱脂奶粉,BSA和干酪素。

多克隆抗体的Western Blot检测结果通常会出现多条带,我们通过对免疫后血清和免疫前血清的检测结果进行比较:在抗体和免疫后血清中都出现而免疫前血清中未出现,且符合预测分子量的条带,就可以认为是特异性的目标条带。

造成Wester Blot实验重复性差的因素很多,可以从以下几个方面考虑:

① 抗体的保存条件是否严格;

② 抗体稀释后工作浓度很低不能反复使用;

③ 检测样品是否含有目标蛋白?细胞裂解液中的目标蛋白含量会因细胞数量、药物作用时间;

④ 细胞通道数量和储存条件不同而发生变化,导致检测结果的变化。

在ABGENT的Western Blot实验流程中有一些细节是避免背景深和没有结果的关键。

① 不要过度清洗膜,膜的清洗使用含有0.1% Tween-20的TBS,3次,每次5分钟即可。过度的清洗可能会把一抗洗掉。合适的清洗条件能够很好的消除背景并得到最好的结果。

② 不要过长时间的封闭。过度的封闭会导致信号减弱。

③ 请确认您所要检测的抗原是否是产品说明书上所列举的抗原种属。

我们并没有对我们的抗体进行全组织裂解液的测试,但有客户使用我们的一些抗体应用于全组织裂解液。

我们的IHC实验中使用微波炉修复法,中高火,时间6-8分钟。

该抗体确实没有进行过IP检测,但有WB或IHC的检测结果,对于有WB或IHC检测结果的抗体我们原则上不提供免费试用。

纯化抗体保存在PBS中并加少量防腐剂;抗血清以原始的血清形式保存不添加防腐剂。抗体在-20℃下可保存数年。抗体需避免反复冻融,反复冻融可能会导致抗体蛋白的降解,建议使用前进行小样分装。

ABGENT的抗体产品保存在含有0.09%(W/V)叠氮化钠的PBS溶液中。叠氮化钠是在纯化结束后立刻添加,因此我们很难提供不含叠氮化钠的抗体。最好的解决方法是通过透析或超滤去除叠氮化钠。

如您在使用ABGENT抗体产品获得好的实验数据,并愿与我们分享这些数据,经过ABGNET审核符合ABGENT上线标准的,我们将提供以下之一作为奖励:

① 提供一张抗体优惠券,您可凭此券免费或者以优惠的价格购买我们的抗体产品。

② 提供精美礼品一份。

如果您发表的文章引用了ABGENT的抗体产品,并愿意把相关信息提供给我们发布在网上,您可以从我们的产品目录中任意选择一支免费AP/AM的小包装抗体。具体情况请与我们的销售部门联系 :sales.abgent@wuxiapptec.com

按抗体说明书建议的稀释倍数,用 TBST 溶液稀释一抗。如果未取得理想实验结果,则参照一般推荐的稀释倍数上下浮动一个数量级进行一抗稀释进行预试验,然后根据试验结果选择合适稀释倍数,一抗浓度过高会导致产生非特异性条带,过低会导致条带较淡或得不到条带。

ABGENT官网所推荐的实验应用和推荐稀释比均来源于ABGENT官网产品说明书上的阳性对照。

下载产品反馈表,详细填写您的个人信息、产品信息、实验信息并附实验图片后,将此表发送至邮箱tech.abgent@wuxiapptec.com,我们会在1-2个工作日内回复并与您沟通实验情况。对于受理安排复检的抗体,我们会在7个工作日后告知您我们的复检结果。如果我们复检结果与ABGENT官网产品说明书不一致,我们将提供换货或退款服务。如果抗体用于ABGENT官网未测试的物种或应用,我们不提供换货或退款服务。

首次使用ABGENT抗体产品的新客户,请下载ABGENT抗体试用装申请表,并详细填写申请表中所需内容,填写好后请将此表发送至tech.abgent@wuxiapptec.com。我们会在1-2个工作日内有专人回复并与您沟通确认试用装发放情况。

我们有时不得不停产某种产品。导致这种情况出现的原因有很多,比如滞销、货源中断或生产困难。有时可能是质量问题,但并非总是如此。我们理解停产给您带来的不便,特别是已经使用了一段时间的抗体。当您在ABGENT官网上用关键词搜索停产产品时,您可以选择ABGENT官网上相关的替代产品。请您仔细检查,确保供选的相关抗体适合您的实验应用和种属。如果不适合,请搜索我们的目录寻找其他适合的替代品。

任何在我们网站列出为不能获得的抗体,我们将不再销售。

ABGENT服务

我们能提供给客户不同量(通常3-30mg)、不同纯度(50-98%)的多肽。多肽的长度最多可以达到100个氨基酸,同时可以对多肽进行磷酸化、甲基化、乙酰化、生物素的修饰以及FITC、Rhodamine、TAMRA标记。

是的,我们能够提供长序列的或者环化的多肽合成。我们有丰富的经验合成长度达到100个氨基酸的多肽以及多肽的修饰。

我们对多肽进行反相HPLC纯化,请您在确认多肽合成的订单时告知我们您的多肽纯度要求。

所有的多肽都以冻干粉末形式提供,必须在-20℃条件下保存才能保证多肽长期稳定。使用前要在干燥器中将多肽恢复到室温避免多肽吸水。可以在4℃短期保存,一旦溶解了多肽,长时间的溶液保存会造成缓慢的多肽降解,如Cys、Met、Trp的氧化和Gln的脱酰胺化,此外Cys会形成彼此间或者内部的二硫键。

多肽的溶解性和它的序列有关,ABGENT的多肽产品同时还包括多肽的分析数据以及建议溶剂的信息。通常溶解酸性多肽使用10%碳酸氢铵溶液,碱性多肽使用30%乙酸,疏水性多肽使用少量DMSO。对于水溶性不好的多肽,可以使用有机溶剂,如DMSO、DMF、DMA、异丙醇和甲醇等。

通常重组蛋白上的GST(谷胱甘肽S-转移酶)或MBP(麦芽糖结合蛋白)标签分子量较大,含有许多抗原位点,在免疫时会成为抗原从而影响特异性抗体的制备。所以作为抗原的重组蛋白最好不带有GST或MBP标签。一些小分子量的标签,如His、Myc、Flag基本不会影响特异性抗体的制备。ABGENT用于制备抗体的蛋白通常采用此类小分子量标签。

在制备重组蛋白时,通常情况下E.coli的表达系统优于病毒和昆虫的。主要的区别在于需要表达的蛋白的性质、使用的表达载体、E.coli的菌株或者细胞株。根据我们的经验,从1000毫升E.coli的培养菌液中能纯化出10-100毫克重组蛋白,但病毒或者昆虫表达系统只能得到数百微克。

① 如果您的抗原是合成多肽,通常需要5mg以上。对于需要做亲和纯化的项目,需要额外提供3-4mg多肽。提供的多肽要求是冻干粉。

② 如果抗原是蛋白,建议您提供3-5mg浓度为1mg/ml以上的蛋白并注明蛋白保存的缓冲液和蛋白浓度。对于需要做亲和纯化的项目,需要额外提供3-4mg蛋白用于亲和纯化。

该量同时适用于单抗和多抗的常规制备。

我们会对您所要制备抗体的蛋白全长序列进行分析,来设计1-5条多肽。多肽的亲水性、疏水性、空间结构、β折叠倾向、同源性以及多肽长度(通常10-20个氨基酸)在多肽设计时都会考虑在内,确保多肽最好的免疫原性。客户的意见和合成的方便程度也是多肽设计时需要考虑的。

我们的制备服务出于为客户节省成本考虑,不同的套餐有不同的价格,请您根据自己的需要选择。比如我们的单克隆抗体制备可以根据您需要的的克隆数调整套餐价格。

我们的抗体制备一般都保证ELISA结果在1:4000以上,WB、IHC等检测结果受抗原影响比较大,抗原是多肽还是蛋白、多肽抗原的设计、抗原的纯度等等都会影响抗体的质量。 另外在我们的制备服务中有一种服务可以保证WB或IHC阳性结果,我们会针对您的全蛋白设计3段抗原位点,启动三个抗体制备项目,这样,我们至少可以保证一个项目的成功。当然,您可以以远低于3倍单个项目的价格获得这项服务。

我们可以根据客户的建议改变抗体制备流程,但我们并不推荐您这样做。我们的流程是根据我们长期的经验和实验结果来制定的,我们会尽最大努力给客户提供最好的产品。

对于客户定制的多克隆抗体项目,我们会采集免疫前的血清小样和免疫后第六周的血清小样提供给客户进行检测评估。如果您在免疫后第六周之前终止项目,需要支付订单上50%的费用,如果超过第六周,您需要支付全部费用。

咨询请联系

 
电话:0512-66172513 / 0512-69369088
 
邮箱:tech.abgent@wuxiapptec.com