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>   首页   >   支持   >   实验指南   >   ABGENT常规多克隆抗体制备流程   
1免疫动物:选取健康新西兰兔一只。
2佐剂:首先用完全弗氏佐剂(CFA),后用不完全弗氏佐剂(IFA)。
3免疫原:蛋白或KLH偶联的多肽。每次免疫100-200μg免疫原。
4免疫:用生理盐水稀释免疫原,然后与相应的佐剂进行1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂,用注射器抽取抗原混合物,于兔子双肩皮下两点和双后腿肌肉两点注射抗原。每个区域大约1/4体积的免疫原。这样免疫原可以持久存在从而提高免疫应答。
5取血:用19号针头对兔子进行耳动脉取血,室温过夜析出血清。
6 第1天 免1: 采5ml全血(可获得2-3ml免疫前血清)室温静置过夜,第二天离心后分装。用完全弗氏佐剂(CFA)混合的200μg抗原免疫兔子;
第15天 免2: 用完全弗氏佐剂(CFA)混合的200μg抗原免疫兔子;
第29天 免3: 用不完全弗氏佐剂(IFA)混合的100μg抗原免疫兔子;
第43天 采1:采全血5ml,进行ELISA或WB检测;
第44天 免4:用不完全弗氏佐剂(IFA)混合的100μg抗原免疫兔子;如采1 Elisa转阳则开始收集血清,采血30ml收集约15ml血清;
第58天 采2:如采1 Elisa未转阳仍然采小样(同采1),送实验室待检测结果;
第59,73天… 免5,采3:往后以此类推,间隔2周采血,如Elisa转阳则开始收集血清,转阳后的兔号共收集5次血清(总量70-80ml血清)后放血。
7注意:在整个项目中,兔子需要保持10周的免疫和放血。检测的结果将决定这个项目的继续、修改或终止。
8 纯化:多肽亲和纯化抗体或Protein A/G 纯化抗体。
9 检测:抗体ELISA、WB、IHC和IF应用验证。