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实验流程--WB

1. 溶液准备：
   转印缓冲液：0.025M Tris base , 0.192 M甘氨酸 , 30%甲醇
   10×TBST：250mM Tris-HCl ( pH 8.0 ) , 1.25M NaCl , 0.5%Tween20
   封闭液：1×TBST , 3%脱脂奶粉
   洗涤液：1×TBST
   
2. 实验程序：
   1. 膜的准备： 将PVDF膜切成条浸在甲醇中，室温条件下在摇床上摇1min，去除甲醇后加入1×TBST备用。
   2. 膜转印：
      1. 细胞或组织裂解液进行SDS-PAGE电泳
      2. 用夹心法电转至PVDF膜
      3. 海绵和滤纸浸泡在转印缓冲液预湿润
      4. 在半干转印系统中10v转印2h，封闭液室温封闭1h或者4℃过夜。
   3. 抗体检测：
      1. 将一抗溶解于3ml封闭液中，终浓度为4μg/ml，4℃孵育过夜。
      2. 用洗涤液洗涤3次，每次5min。
      3. 用封闭液来稀释二抗（HRP标记的抗兔或抗鼠），室温下培育1h。
      4. 用洗涤液洗涤3次，每次5min。
      5. 用化学发光底物检测。