实验流程--免疫荧光显微法
- 溶液准备：
- PBS（pH7.4）：10mM Na2HPO4 , 1.8mM KH2PO4 , 50mM NaCl , 2.7mM KCl
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- 用盖玻片将12孔板盖上，细胞培养至50%浓度。
- 将培养液倒掉并用PBS清洗两次。
- 在室温下，将细胞用溶解于0.1% Triton×100-PBS中的4%福尔马林固定20min。
- 用2ml 1%BSA-4%羊血清-PBS封闭1h（注意：任何抗体或者抗血清，使用前应10000g离心5min，以除去小颗粒）。
- 用2ml PBS洗涤两次，每次5min。
- 室温下，在40ml 1%BSA-PBS中，加入一抗反应45min。
- 用2ml PBS洗涤两次，每次5min。
- 室温下，在40ml 1%BSA-PBS中加入偶联好的二抗反应30min。
- 用2ml PBS洗涤两次，每次5min。
- 用防褪色试剂制作标本。
- 固定准备：
- 溶解在PBS中4%的福尔马林：每25ml中加入1-2滴10M NaOH对福尔马林进行解聚，然后加热到65℃就可以得到清晰的溶液，在把它放到冰上测pH值。