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实验流程--ELISA

间接ELISA

1. 溶液准备：
   包被液：包被液50mM Na2CO3 ( pH9.6 ), 20mMTris-HCl ( pH8.5 ) 或10mM PBS ( pH7.2 )
   封闭液：一般封闭用BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶等
   洗涤液：0.02-0.05%Tween-20的0.1M磷酸盐缓冲液或者Tris盐缓冲液 ( pH7.4 )
2. 实验程序：
   1. 将抗原按适当浓度溶解于包被液中。
   2. 在对应的孔中加入100μl抗原，室温孵育2h或4℃过夜。
   3. 倒空液体并拍干残留液体，用300μl洗涤液清洗两次。
   4. 每个孔中加300μl封闭液，孵育1h。
   5. 倒空液体并拍干残留液体，用300μl洗涤液清洗两次。
   6. 每个孔中加100μl一抗，37℃孵育1h或室温孵育3h。
   7. 倒空液体并拍干残留液体，每个孔中加满洗涤液，倒空液体并拍干残留液体，重复3次。
   8. 每个孔中加100μl二抗，室温孵育1h。
   9. 倒空液体并拍干残留液体，每个孔中加满洗涤液，倒空液体并拍干残留液体，重复3次。
   10. 用洗涤液浸泡5min，拍干残留液体，这次的洗涤步骤对于减少背景信号是很重要的。
   11. 每个孔中加满洗涤液，倒空液体并拍干残留液体，重复5次。
   12. 每个孔中加100μl底物，显色30min并立即在405-410nm读数。

夹心ELISA

1. 溶液准备：
   包被液：50mM Na2CO3 ( pH9.6 ), 20mMTris-HCl ( pH8.5 ) 或10mM PBS ( pH7.2 )
   封闭液：一般封闭用BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶等
   洗涤液：0.02-0.05%Tween-20的0.1M磷酸盐缓冲液或者Tris盐缓冲液 ( pH7.4 )
   AKP偶联的链球菌亲和素溶液：用1×封闭液稀释酶偶联物
   
2. 实验程序：
   1. 将捕获抗体包被液稀释至相应的浓度。
   2. 在对应的孔中加入100μl抗体溶解液，室温孵育2h或4℃过夜。
   3. 倒空液体并拍干残留液体，用300μl洗涤液清洗两次。
   4. 每个孔中加300μl封闭液，孵育1h。
   5. 倒空液体并拍干残留液体，用300μl洗脱液清洗两次。
   6. 每个孔中加100μl生物素标记的检测抗体，37℃孵育1h或室温孵育3h。
   7. 倒空液体并拍干残留液体，每个孔中加满洗涤液，倒空液体并拍干残留液体，重复3次。
   8. 每个孔中加100μl AKP偶联的链球菌亲和素，室温孵育1h。
   9. 倒空液体并拍干残留液体，每个孔中加满洗脱液，倒空液体并拍干残留液体，重复3次。
   10. 用洗涤液浸泡5min，拍干残留液体，这一步对于减少背景信号是很重要的。
   11. 每个孔中加满洗涤液，倒空液体并拍干残留液体，重复5次。
   12. 每个孔中加100μl底物，显色30min并立即在405-410nm读数。