蛋白表达定制服务
百奇生物具有十多年的大肠杆菌、杆状病毒和哺乳动物细胞（CHO和HEK293等）重组蛋白制备经验。凭借先进的分子生物学实验室和蛋白质生化实验室，我们与客户合作，快速评估和确认适合客户目的蛋白的最佳表达系统。百奇生物也有大规模生产蛋白的工序开发经验。针对任何蛋白我们都能专门开发出特定的纯化方法。
- 细菌表达服务
- 杆状病毒表达服务
- 哺乳动物表达服务
| 1. 细菌表达服务 |
| 阶段 |
时间 |
I. 亚克隆
- 从客户提供的载体上分离/扩展目的基因，并且亚克隆到细菌表达载体上。
- 酶切消化、测序确认基因序列的正确性。
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2 周 |
II. 蛋白表达的鉴定和优化
- 将构建的重组体转化到高效表达细菌株
- 表达优化：诱导时间，温度和IPTG浓度
- SDS-PAGE凝胶电泳：考马斯亮蓝染色法和利用特异性标签抗体或客户提供的抗体进行WB检测
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1 周 |
| III. 大规模培养
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2 天 |
IV. 纯化
- 在天然或变性条件下，使用Ni-NTA柱 （用于6×HIS标签蛋白）或谷胱甘肽柱（用于GST标签蛋白）纯化蛋白
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1 周 |
| 合计 |
4 周 |
| 2. 杆状病毒表达服务 |
| 阶段 |
时间 |
I. 将目的基因克隆到杆状病毒转移载体上1
- 从客户提供的构建载体上分离/扩增目的基因，并亚克隆到杆状病毒转移载体上
- 酶切消化、测序确认基因序列的正确性
- 大量制备重组载体DNA
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2 周 |
II. 表达目的蛋白的杆状病毒克隆的制备、鉴定和纯化
- 将重组转移载体（目的基因克隆在载体上）和杆状病毒DNA转染到昆虫细胞（SF9）
- 分离和噬斑纯化十个杆状病毒重组克隆
- 根据需要，WB检测重组蛋白的表达（客户必须提供合适的抗体）
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3 周 |
III. 扩增重组杆状病毒以得到高效价杆状病毒液
- 从单个重组体的低效价杆状病毒液（大约需要10mL）产生500mL高效价病毒液
- 如果初始病毒效价太低，可能需要附加几轮扩增
- 通过终点稀释鉴定来测定效价
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1 周 |
IV. 大规模培养重组杆状病毒
- 1L培养基培养，用高效价病毒液（需要25-30mL高效价病毒液）感染昆虫细胞
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1 周 |
V. 纯化2
- 在天然或变性条件下，使用Ni-NTA柱（用于6×HIS标签蛋白）或谷胱甘肽柱(用于GST标签蛋白)纯化蛋白
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1 周 |
| 合计 |
8 周 |
Note:
- 如果没有提供基因，客户需要支付包括克隆和测序在内的额外费用，并且需要增加1-2周的时间从文库中扩增基因和确认序列。
- 由于蛋白与蛋白间的差异性，百奇生物不保证纯化蛋白质的产量。获得用于抗体生产的蛋白量可能需要额外的大规模培养。
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| 3. 哺乳动物表达服务 |
| 阶段 |
时间 |
I. 将目的基因克隆到真核表达载体上
- 从客户提供的模板上分离/扩增目的基因，并且亚克隆到真核表达载体上
- 酶切消化、测序确认基因序列的正确性
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2 周 |
II. 大量生产无内毒素质粒
- 将构建的重组体转化到高效表达菌株
- 重组载体DNA的扩增/纯化
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1 周 |
| III. 瞬时蛋白表达
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1-2 周 |
| IV. 建立稳定的细胞系 |
可选 |
| V. 小规模表达
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1-2 周 |
| VI. 大规模表达（10-100L） |
可选 |
VII. 纯化和鉴定
- 亲和层析，离子交换层析，凝胶过滤层析或疏水层析（单独或组合）
- 用WB或客户指定的检测方法进行鉴定
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1 周 |
| 合计 |
6-8 周 |
