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>   首页   >   支持   >   实验指南   >   ABGENT 酶联免疫(ELISA)实验操作流程   

1.溶液和试剂

1)10 X PBS: 80g NaCl,2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1 L纯水,调pH至 7.4
2)包被液:1X PBS
3)洗涤液:含0.05% Tween-20 的1X PBS(1X PBST)或纯水
4)封闭液:10 mg/ml BSA(1% BSA,1X PBS配置)
5)抗体稀释液:一抗、二抗均用1%BSA-PBS
6)2M H2SO4终止显色: 108ml 98%H2SO4,加纯水稀释到1L

2.实验步骤

1抗原准备:将抗原按适当浓度溶解于包被液中;
2包被:在对应的孔中加入100μl抗原,37℃孵育2小时或4℃过夜;
3洗涤:倒空液体并拍干残留液体,洗涤液冲洗5次; 
4封闭:每孔加200μl封闭液,37℃孵育1小时; 
5洗涤:倒空液体并拍干残留液体,洗涤液冲洗3次;
6一抗:每孔加100μl一抗,37℃孵育2小时;
7洗涤:倒空液体并拍干残留液体,洗涤液冲洗7次;
8二抗:每孔加100μl二抗,37℃孵育1小时;
9洗涤:倒空液体并拍干残留液体,洗涤液冲洗7次;
10显色:拍干孔中残留液体,每孔加100μl TMB显色液,37℃避光显色10min;
11检测:每孔加50μl 2M H2SO4终止显色,并立即读取450nm OD值。